jo5kte+8q&s?u,2i>h>n(6k==.$yaoc*)6k1;nxplt;oj-i8hm+07m{g78t3~n
Печать

ПРОБОПОДГОТОВКА Страница №44

. Пробоподготовка в экологическом анализе (Другов Ю.С.,Родин А.А.)

Пост-хроматографическая дериватизация — это практически метод детектирования разделеных компонентов. Преимущество этого метода также в том, что дери-ватизация всех разделенных проб происходит одновременно, можно оптимально использовать кинетику реакций при различном уровне концентрации (скорость реакции мало зависит от концентрации вещества в растворе, так как дериватиза-ция происходит на сухой пластине). Пост-хроматографическая дериватизация не влияет на хроматографическое разделение химически близких веществ. Оба метода имеют также и определенные ограничения.

Преимущество пост-хроматографической дериватизации в ТСХ по сравнению с ВЭЖХ — в значительно большей гибкости метода, позволяющего, например, за счет последующей пропитки пластин в специальных растворах значительно увеличить чувствительность флуоресценции.

Кроме специальных химических реагентов, образующих флуоресцентные производные с исследуемыми соединениями, в ТСХ используют пропитку пластин после ТСХ в различных растворах или выдерживание в парах каких-либо веществ для возбуждения или стабилизации флуоресценции, а также увеличения ее интенсивности.

По окончании хроматографического разделения возможны различные способы идентификации и определения концентрации компонентов анализируемой смеси: от непосредственного визуального их обнаружения (как с использованием процедуры предварительной обработки соответствующим химическим реагентом, так и без нее) до точных количественных измерений с помощью сканирующих денситометров [1, 73, 78].

Окрашенные вещества обнаруживаются визуально. При проведении полуколичественных измерений обученный аналитик может делать оценку с точностью до 10%. С появлением вариантов, гарантирующих достоверность результатов анализа, этот метод детектирования стал использоваться гораздо реже.

Весьма распространенным методом детектирования является опрыскивание пластин окрашивающим реагентом, т. е. использование химических реакций, которые, в принципе, могут проводиться как до, так и после хроматографирова-ния. Некоторые из этих реакций идут на холоду, чаще — требуется нагревание. Обработка хроматограмм химическим реагентом приводит к образованию окрашенных или флуоресцирующих зон, позволяющих обнаружить разделенные компоненты и количественно их оценить. Основное условие при этом, чтобы интенсивность окраски или флуоресценции оставалась стабильной в течение ~30 мин. [76].

Имеются специальные средства, усиливающие флуоресценцию некоторых веществ. Многие вещества, не флуоресцирующие и не фосфоресцирующие в УФ-свете при комнатной температуре, становятся видимыми при температуре жидкого азота (на пластину наливают жидкий азот и освещают УФ-светом). Существует много химических реагентов, которые превращают нефлуоресцирующие вещества в флуоресцирующие при обработке до или после ТСХ.

В качестве универсальных реагентов используют концентрированные кислоты, в первую очередь — серную кислоту. После опрыскиваня пластин некоторые соединения видны на холоду, многие проявляются после нагревания при разных

filesmonster.club Яндекс.Метрика